Коллектив авторов - Теоретические основы и практическое применение методов иммуногистохимии

Теоретические основы и практическое применение методов иммуногистохимии

Коржевский Дмитрий Эдуардович – доктор медицинских наук, заведующий лабораторией функциональной морфологии центральной и периферической нервной системы отдела общей и частной морфологии ФГБУ «НИИЭМ» СЗО РАМН;

Кирик Ольга Викторовна – кандидат биологических наук, старший научный сотрудник лаборатории функциональной морфологии центральной и периферической нервной системы отдела общей и частной морфологии ФГБУ «НИИЭМ» СЗО РАМН;

Петрова Елена Сергеевна – кандидат биологических наук, старший научный сотрудник лаборатории функциональной морфологии центральной и периферической нервной системы отдела общей и частной морфологии ФГБУ «НИИЭМ» СЗО РАМН;

Карпенко Марина Николаевна – кандидат биологических наук, научный сотрудник лаборатории нейробиологии интегративных функций мозга физиологического отдела им. И. П. Павлова ФГБУ «НИИЭМ» СЗО РАМН;

Григорьев Игорь Павлович – кандидат биологических наук, старший научный сотрудник лаборатории функциональной морфологии центральной и периферической нервной системы отдела общей и частной морфологии ФГБУ «НИИЭМ» СЗО РАМН;

Сухорукова Елена Геннадьевна – старший научный сотрудник лаборатории функциональной морфологии центральной и периферической нервной системы отдела общей и частной морфологии ФГБУ «НИИЭМ» СЗО РАМН;

Колос Елена Андреевна – младший научный сотрудник лаборатории функциональной морфологии центральной и периферической нервной системы отдела общей и частной морфологии ФГБУ «НИИЭМ» СЗО РАМН;

Гиляров Александр Владимирович – кандидат медицинских наук

УСЛОВНЫЕ СОКРАЩЕНИЯ

БТIII – бета-тубулин III

ГАМК – γ-аминомасляная кислота

ГЭБ – гематоэнцефалический барьер

ДААК – декарбоксилаза L-ароматических аминокислот

ИГХ – иммуногистохимия

мРНК – матричная рибонуклеиновая кислота

МТ – микротрубочка

НСК – нейральные стволовые клетки

ПФ – промежуточный филамент

ЦНС – центральная нервная система

ABC-метод – avidin and biotinylated horseradish peroxidase macro-molecular сomplex

AEC – 3-амино-9-этилкарбазол

AIF-1 – allograft inflammatory factor-1

AP – щелочная фосфатаза

APAAP – «щелочная фосфатаза – антищелочная фосфатаза»

AS-MX – нафтол АС-Микс фосфат

BSA – бычий сывороточный альбумин

CAM – молекула клеточной адгезии

CDK – циклин-зависимая киназа

CN – 4-хлор-1-нафтол

CNP – 2′,3′-циклический нуклеотид 3′-фосфодиэстеразы

DAB – 3,3′-диаминобензидина

DCX – даблкортин

EDTA – этилендиаминтетрауксусная кислота

ENO1 – ненейрональная енолаза (α)

ENO2 – нейронспецифическая енолаза (γ)

ENO3 – мышечная енолаза (β)

FITC – флуоресцеина изотиоцианат

GAD – глутаматдекарбоксилаза

GFAP – глиальный фибриллярный кислый белок

HRP – пероксидаза хрена

LAB – авидин-биотиновая методика

LSAB – стрептавидин-биотиновая методика

L-ДОФА – L-3,4-диоксифенилаланин

MAG – миелин-ассоциированный гликопротеин

МАР2 – микротубулин-ассоциированный протеин 2

MBP – основной белок миелина

MOBP – основной белок олигодендроцитов, связанный с миелином

MOG – миелиновый гликопротеин олигодендроцитов

MRF-1 – microglia response factor

NCAM – нейрональная молекула клеточной адгезии

NF-H – высокомолекулярные белки нейрофиламентов

NF-L – низкомолекулярные белки нейрофиламентов

NF-M – среднемолекулярные белки нейрофиламентов

NSE – нейронспецифическая енолаза

OSP – олигодендроцит-специфический белок

PAP – пероксидаза-антипероксидазный метод

PBS – фосфатно-солевой буфер

PCNA – ядерный антиген пролиферирующих клеток

PGP – протеиновые генные продукты

PI – пропидий иодид

PKA – сАМР-зависимая протеинкиназа

PLP – протеолипидный белок

PRD – домен, богатый пролином

PSA – полисиаловая кислота

TBS – трис-солевой буфер

TRITC – тетраметилродамин изотиоцианат

ПРЕДИСЛОВИЕ

В последние годы методы иммуногистохимии заняли одно из главных мест среди методов морфологической диагностики. Неудивительно, что научная и методическая литература, посвященная их применению, привлекает пристальное внимание научных работников и специалистов практического здравоохранения. С сожалением приходится констатировать, что в настоящее время подобная литература отсутствует на прилавках отечественных книжных магазинов. Из наиболее важных руководств, изданных на русском языке после 1990 г., в которых определенное место отведено вопросам применения методов иммуногистохимии, следует отметить «Микроскопическую технику» (под ред. Д. С. Саркисова и Ю. Л. Перова. – М.: Медицина, 1996), «Молекулярную клиническую диагностику» (под ред. С. Херрингтона и Дж. Макги. – М.: Мир, 1999) и фундаментальный обзор иммуноцитохимических методов М. В. Угрюмова (Итоги науки и техники. Серия «Морфология человека и животных». – Т. 15. – М.: ВИНИТИ, 1991). Перечисленные книги давно стали библиографической редкостью. Кроме того, следует признать, что они не включают информацию о некоторых современных методических приемах, получивших широкое распространение в последние годы (например, о способах теплового демаскирования антигенов). Все вышеперечисленное и побудило авторов к написанию данного краткого руководства.

Отличительной особенностью данного руководства является сочетание необходимых сведений о теоретических основах методов иммуногистохимии с примерами их практического использования на основе оригинальных и усовершенствованных авторами протоколов обработки препаратов, помещенных в приложении. Поскольку в круг интересов авторов входит изучение органов нервной системы, книга дополнена теоретическими сведениями и практическими рекомендациями по использованию важнейших нейрональных и глиальных маркеров дифференциации, что, несомненно, будет полезным как для нейроморфологов, так и для нейрофизиологов.

Настоящее руководство отражает современный уровень развития иммуногистохимии как науки и аккумулирует многолетний опыт сотрудников лаборатории функциональной морфологии центральной и периферической нервной системы отдела общей и частной морфологии НИИ экспериментальной медицины СЗО РАМН, связанный с использованием методов иммуногистохимии.

ПРЕДИСЛОВИЕ КО ВТОРОМУ ИЗДАНИЮ

Первое издание этой книги вышло не так давно, но уже появилась необходимость выпустить исправленное и дополненное второе издание. Наибольшие изменения претерпели пятая и шестая главы, где описываются методы демаскирования антигенов и изложены практические приемы, используемые при постановке иммуногистохимических реакций. В шестой главе появился и новый раздел «Организация работы иммуногистохимической лаборатории». Внесено существенное добавление в главу 10 – раздел, посвященный важному нейрональному маркеру – белку PGP 9.5. Протокол обработки препаратов для постановки реакции на белок PGP 9.5 добавлен в приложение 5. Обновлен состав авторского коллектива, принимавшего участие в работе над текстами, вошедшими в состав руководства.

Авторы надеются, что внесенные изменения и дополнения увеличили информативность второго издания руководства, которое адресовано работникам практического здравоохранения и научным сотрудникам, использующим методы иммуногистохимического исследования в своей повседневной деятельности.

Глава 1.

ИММУНОГИСТОХИМИЯ – СОВРЕМЕННЫЙ МЕТОД МОРФОЛОГИЧЕСКОЙ ДИАГНОСТИКИ

Термин «иммуногистохимия» образован из трех составляющих, указывающих на три медико-биологические дисциплины, – иммунологию, гистологию и химию, которые послужили основой для этого нового научного направления. Иммуногистохимия (ИГХ), или иммуноцитохимия (ИЦХ), – это область биологической и медицинской науки, теоретическое обоснование, разработка и практическое применение современных методов гистологического исследования и микроскопической диагностики, базирующихся на использовании реакции «антиген – антитело» для селективного выявления белков (и других молекул, обладающих антигенными свойствами) в гистологических срезах и цитологических препаратах.

Понятия «иммуногистохимия» и «иммуноцитохимия», по существу, должны считаться синонимами. Однако на практике нередко под иммуногистохимическими подразумевают методы, используемые для определения искомых антигенов в тканевых срезах, тогда как реакции с антигенами, выявляемыми в цитологических препаратах, называют иммуноцитохимическими. Следует заметить, что принципиальных различий в теоретических основах и практическом применении этих методов нет. В дальнейшем в настоящей книге будет использоваться термин «иммуногистохимия» и только в тех случаях, когда это будет необходимо в соответствии с контекстом, – «иммуноцитохимия».