Михаил Ингерлейб - Полный справочник анализов и исследований в медицине Страница 31

Причины патологических изменений в спермограмме:

• варикоцеле;

• вредное воздействие соединений свинца, ртути, рентгеновского и другого излучения;

• генетические (врожденные) заболевания;

• гормональные нарушения (необходимо определять уровень ФСГ, ЛГ, тестостерона, пролактина – см. раздел 5. «Исследование гормонов»);

• нарушение проходимости семявыносящих протоков;

• токсическое воздействие (алкоголь, лекарственные средства, наркотики);

• хронические воспалительные заболевания половых органов.

Глава 6

ДНК-диагностика: ПЦР-анализ

ДНК-диагностика – это один из наиболее современных высокотехнологичных методов исследования, который широко применяется в диагностике инфекционных заболеваний, позволяя обнаруживать даже единичные микроорганизмы в организме человека. В современной клинической практике ДНК-диагностика объединяет несколько методов исследования, самым распространенным из которых является метод ПЦР (полимеразной цепной реакции).

Первоначально сам принцип метода полимеразной цепной реакции (ПЦР) был разработан Кэрри Мюллисом в 1983 г. Открытие полимеразной цепной реакции стало одним из наиболее выдающихся событий в области молекулярной биологии в последней четверти XX века, и за разработку ПЦР-анализа Кэрри Мюллис уже в 1993 г. был удостоен Нобелевской премии в области химии.

Анализ методом ПЦР основан на обнаружении в материале исследования небольшого фрагмента ДНК возбудителя той инфекции, которую подозревает врач. Говоря «небольшой фрагмент ДНК», мы подразумеваем «обрывок» нуклеиновой цепочки длиной всего в несколько сотен пар нуклеотидов – тогда как любая, самая простая ДНК включает в себя не менее нескольких тысяч оснований. Такой подход является наиболее эффективным при диагностике внутриклеточных паразитов и медленнорастущих микроорганизмов, требующих сложных условий культивирования для ранее использовавшихся способов диагностики.

Благодаря высокой точности определения появилась возможность поиска возбудителей болезней практически в любом биологическом материале. Сегодня методу ПЦР-анализа подвергаются:

• соскоб эпителиальных клеток (соскоб из уретры у мужчин и у женщин, соскоб из цервикального канала);

• кровь, плазма, сыворотка крови;

• биологические жидкости (сок простаты, плевральная, спинномозговая, околоплодная, суставная жидкости, слюна);

• моча;

• мокрота;

• биопаты желудка и двенадцатиперстной кишки;

• слизь и другие биологические выделения.

Достоинства метода

• Высокая специфичность за счет того, что искомые кусочки генетического материала имеют уникальные последовательности ДНК.

• Высокая чувствительность за счет многократного размножения исходного материала.

• Универсальность – при правильном подходе может быть проанализирован любой материал.

• Быстрое получение результата (в отличие от бактериологических методов, где результата приходится ждать довольно долго).

• Возможность одновременной диагностики многих возбудителей (анаэробов и аэробов; вирусов, бактерий и грибов).

• Для некоторых микроорганизмов ПЦР является практически единственным методом диагностики (например, для Mycoplasma genitalium).

ПЦР-анализ может быть качественный и количественный – т. е. может просто свидетельствовать о наличии того или иного возбудителя, а может и давать информацию о количественном содержании возбудителя в тех или иных биологических материалах.

Как подготовиться к ПЦР-анализу

Достоверность результатов лабораторной диагностики ПЦР зависит не только от опыта и профессионализма врача-лаборанта, возможностей данной лаборатории, но и от того, соблюдал ли пациент рекомендации врача, насколько правильной была его подготовка к проведению анализа. При сдаче анализа методом ПЦР врачи рекомендуют соблюдать следующие правила:

• за сутки до проведения анализа не жить половой жизнью;

• сдача ПЦР-анализа крови проводится натощак, т. е. необходимо ничего не есть, не пить и не жевать жвачку;

• для ПЦР-анализа мочи используется первая утренняя порция, собранная в стерильный контейнер.

ПЦР-анализы

В устоявшейся клинической практике ПЦР-анализы обычно сдают «блоками[16]» на определенные группы возбудителей.

Например:

• ПЦР-диагностика инфекций, передаваемых половым путем, где одновременно выявляются:

– бактериальные инфекции: Chlamydia trachomatis (хламидия), Mycoplasma hominis (микоплазма человека), Gardnerella vaginalis (гарднерелла), Mycoplasma genitalium (микоплазма генитальная), Ureaplasma parvum (уреаплазма парвум), Ureaplasma urealyticum (уреаплазма уреалитикум), Neisseria gonorrhoeae (гонококки);

– вирусные инфекции: HPV (Human Papillomavirus, папилломавирус человека) типы 16, 31, 33, 35Н, 52, 58, 67; типы 18, 45, 39, 59; тип 6, 11; тип 26, 51;

– инфекции, вызванные простейшими: Trichomonas vaginalis – трихомонады;

– грибковые инфекции: Candida albicans – кандида;

• ПЦР-диагностика бактериальных инфекций:

– бруцеллы: Brucella species вызывает заболевания дыхательных путей, мочевыделительной системы, органов половой сферы и опорно-двигательного аппарата;

– гемофилы: к настоящему времени известно 9 видов гемофил, вызывающих инфекции у человека. Haemophilus ducrei вызывает инфекции, передающиеся половым путем (симптомы – обильные водянистые, периодически гноевидные выделения с неприятным запахом из половых путей, дизурические явления). Haemophilus speciec вызывает заболевания дыхательных путей (симптомы – поражение дыхательных путей; кашель с мокротой; повышение температуры тела; слабость, недомогание);

– кампилобактерии: Сampulobacter species вызывает воспалительные заболевания половых органов у женщин и мужчин со следующими симптомами:

– дизурические явления (небольшие рези при мочеиспускании);

– слизисто-гнойные выделения из половых путей;

– тянущие боли внизу живота;

– листерии: Listeria monocytogenes вызывает заболевания отделов малого таза, мочевыводящих путей, суставов, органов дыхания со следующими симптомами:

– слизисто-гнойные выделения из половых путей;

– боли внизу живота;

– отек суставов, боли в суставах;

– кашель с мокротой;

– дизурические явления;

– микобактерии туберкулеза: развитие туберкулезной инфекции вызывают 4 вида микобактерий: Mycobacterium tuberculosis; Mycobacterium bovis; Mycobacterium africanum; Mycobacterium microti. Однако в патогенезе туберкулеза у человека ведущая роль принадлежит именно Mycobacterium tuberculosis. Во всем мире каждый год регистрируют около 8 миллионов новых случаев этого тяжелого заболевания, около 3 миллионов человек ежегодно умирает от туберкулеза;

– микоплазмы: внутриклеточные микробы, очень широко распространены в природе. Уреаплазмы – это особая и наиболее «популярная» разновидность патогенных для человека микоплазм. На их долю приходится большая часть хронических микоплазмозов человека. Кроме уреаплазм известно еще несколько видов безусловно патогенных для человека видов: Mycoplasma species, Mycoplasma pneumonia, Mycoplasma hominis, Mycoplasma genitalium, Ureaplasma urealyticum, Urea-plasma parvum. Наиболее часто патогенными видами микоплазм поражаются:

– мочеполовые органы: пиелонефрит, уретрит, нарушение овуляции и сперматогенеза;

– сердечно-сосудистая система: артериальная гипотензия (гипотония), кардит, перикардит;

– органы пищеварения: невирусный гепатит, гастрит, холецистит, кишечные дисфункции (упорные диареи);

– респираторные органы: ОРЗ, хронический ринит, атипичная пневмония (не путать с азиатской «атипической пневмонией»!);

– суставы: ревматоидный артрит, подагра;

– центральная и периферическая нервная система: неврастении, невралгии, локальные болевые синдромы и, по некоторым данным, демиелинизирующие заболевания;

– кожа и слизистые оболочки: повышенная ломкость и проницаемость капилляров, вульгарные угри, простой герпес (микоплазмы принимают участие в транспорте вируса);

– нейссерии: для человека патогенными являются Neisseria gonorrhoeae и Neisseria meningitides, также у человека выделяют непатогенные виды N. sicca, N. mucosa, N. perflava. Neisseria gonorrhoeae является возбудителем специфического венерического заболевания – гонореи;

– стрептококки: большинство стрептококков входят в состав нормальной микрофлоры дыхательных, мочевых, половых путей и ЖКТ, но некоторые их виды имеют важное значение как возбудители болезней человека:

– стрептококки группы A (Streptococcus pyogenes) вызывают ангину – одну из самых распространенных среди детей школьного возраста инфекций, а также широко известные постинфекционные заболевания – ревматизм и острый гломерулонефрит;

– стрептококки группы В (Streptococcus agalactiae) – основные возбудители сепсиса и менингита у новорожденных, послеродового сепсиса и эндометрита;

– трепонема: Treponema pallidum – возбудитель сифилиса;