Интернет-журнал "Домашняя лаборатория", 2007 №5 - Федорочев Страница 73

Через 2–3 дня после инокуляции, (если инокуляция прошла успешно), кусочек агара начнет обрастать пухом мицелия, а в местах соприкосновения с зерном мицелий начнет перебираться на субстрат. Мицелий растет довольно быстро и с каждым днем осваивает все большую поверхность субстрата, перебираясь по зернам и образовывая полностью заросшие участки.

Как только мицелий начал активно распространяться по субстрату, и появились полностью обросшие участки из нескольких зерен, субстрат можно "перетряхнуть". Во время перетряхивания, обросший мицелием участок субстрата разбивается на отдельные зерна, которые, попадая в новые места, образуют сразу несколько новых очагов развития мицелия — это существенно сокращает время освоения мицелием субстрата, и способствует более равномерному его зарастанию.

Но, поскольку большая часть зерна еще не обросла мицелием и риск ее заражения еще слишком велик, перетряхивать субстрат следует очень аккуратно. При перетряхивании, нужно следить за тем, чтобы зерно как можно меньше касалось крышки банки и самого тампона. В этих местах могут находиться посторонние микроорганизмы, пробравшиеся "из вне", которые могут привести к заражению субстрата. Следует не "трясти" банку из стороны в сторону, а удерживая её в одной руке, другой рукой наносить удары по нижней части банки. Таким образом, субстрат будет перемешиваться внизу банки, почти не попадая в ее верхнюю часть. Сразу после перетряхивания субстрата, зёрна обросшие мицелием теряют свою "пушистость" и их практически невозможно отыскать в общей массе.

Но уже через 1–2 дня на некоторых зёрнах, становятся видны белые точки мицелия, которые быстро увеличиваются в размере и, перебираясь на соседние зерна, завоевывают новые территории. Через несколько дней, мицелий разрастается по субстрату и снова образовывает полностью заросшие участки. Когда это произошло, перетряхивание субстрата следует повторить. С каждым новым перетряхиванием субстрата, очагов развития мицелия становиться все больше. И зарастание происходит все быстрее. Для полного обрастания субстрата мицелием, обычно требуется 3–5 недель, в зависимости от температуры окружающего воздуха. Чем меньше остается неосвоенного мицелием субстрата, тем меньше риск его заражения при перетряхивании. Но все равно, перетряхивать субстрат следует как можно аккуратней, т. к. если заражение все-таки произойдет, субстрат придется выбросить, а банку придется заново стерилизовать. И будет очень обидно, если это случиться уже в самом конце колонизации субстрата.

Если заражение субстрата все же произошло, субстрат из этой банки необходимо выбросить. Некоторые виды плесени содержат токсины и могут быть очень опасны для здоровья человека. Поэтому зараженный субстрат проще выкинуть и приготовить все заново.

Нормальный цвет мицелия — белый, допускаются лишь белый цвет с легким голубоватым или желтоватым оттенком. Нормальный запах мицелия — грибной, но запах мицелия практически не чувствуется, его можно почувствовать либо сразу после перетряхивания субстрата (уже на завершающей стадии, когда почти все зерно обросло мицелием), либо при перекладывании субстрата из банки в контейнер. Все другие цвета и запахи — признак заражения субстрата. На снимке справа показано как выглядит полностью обросшее мицелием зерно.

Инокуляция зерна мастер-культурой

Будучи полностью колонизированными эти мастер-банки могут быть использованы для дальнейшего производства зерновой грибницы в литровых или 2-х литровых контейнерах. Пересадку мастер-культуры следует произвести в течении нескольких дней после полной колонизации банок, в противном случае могут возникнут трудности с разделением грибницы на отдельные зёрна. Ниже приведено пошаговое описание техники пересадки с зерна на зерно:

1. Тщательно исследуйте каждую банку на наличие признаков заражения. Обратите внимание на следующие отклонения: слишком плотное зарастание; участки со слабым или подавленным ростом; зёрна покрытые слизью или выглядящие мокрыми (признак бактериального заражения); лопнувшие зёрна с мертвенно-бледной, неровной поверхностью; и любые необычные оттенки цвета. В случае возникновения сомнений слегка приподнимите крышку и понюхайте грибницу — кислый запах «гнилого яблока» или же сильный душок обычно являются признаками бактериальной деятельности или заражения плесенью. От банок с таким ароматом следует избавиться. (Иногда банки только частично поражённые бактериями можно использовать для плодоношения, нанеся покровный слой). Никогда НЕ используйте подозрительные банки для последующих инокуляций.

2. Выбрав самые красивые банки с мастер-грибницей, разбейте мицелий ударяя банки о шину или похлопывая ладонью. Грибница должна легко разделиться на отдельные зёрна. Встряхните столько мастер-банок сколько вам может потребоваться, учитывая что каждой из них вполне достаточно для инокуляции от десяти до двенадцати литровых или от семи до девяти двухлитровых банок. Перетряхнув, ПОСТАВЬТЕ ЭТИ БАНКИ С ГРИБНИЦЕЙ НА ОТДЕЛЬНУЮ ПОЛКУ И ВЫЖДИТЕ ОТ ДВЕНАДЦАТИ ДО ДВАДЦАТИ ЧЕТЫРЁХ ЧАСОВ ДО ПОСЛЕДУЮЩЕГО ИСПОЛЬЗОВАНИЯ. Этот период выжидания очень важен, т. к. в некоторых из них грибница не сможет развиваться дальше, обычно по причине бактериального заражения. Если бы эти банки были использованы для дальнейших пересадок, заражение разнеслось бы ещё на десять банок.

3. Повторно проинспектируйте банки на признаки контаминации. После 12 ч или суток мицелий снова покажет признаки роста.

4. Если вы перетряхнули мастер-банки вечером, то наутро уже можно приступать к инокуляции или как только остынут новые банки с зерном (второе поколение, G-2). Опять, вымойте лабораторию, проведите комплекс мер в рамках личной гигиены и наденьте свежевыстиранную рабочую одежду.

Поместите 10 стерилизованных банок с зерном на рабочую поверхность в стерильной комнате. Ослабьте крышки на каждой из них так, чтобы они легко снимались одной рукой. Мягко встряхните мастер-банку чтобы зерно рассыпалось и разделилось на отдельные зёрна. Держите банку с мастер-культурой в вашей основной руке, другой рукой удалите её крышку и откройте крышку первой банки для инокуляции. Покручивая мастер-банку из стороны в сторону отсыпьте десятую часть грибницы в первую банку, накройте её крышкой и переходите ко второй, третьей, четвёртой и так пока не проинокулируете всю партию. Закончив с первой партией накрепко заверните все крышки. Заверните крышку и на пустой уже мастер-банке и поставьте её в сторону. По очереди возьмите каждую проинокулированную банку и, чередуя потряхивание и вращение, распределите мицелий равномерно по всей банке.

5. Инкубируйте при температуре присущей культивируемому виду. Уже через неделю мицелий должен распространиться на всё зерно. Пометив эти банки как G-

2, можете использовать их для дальнейших инокуляций, как грибницу для внесения в бедные субстраты или для плодоношения прямо с зерна.

Некоторые виды менее агрессивны, чем другие. У Agaricus brunnescens, к примеру может уйти до двух с половиной