М. Сысоева - Высокодисперсные коллоидные системы и меланины чаги Страница 5

Наблюдения за органами и системами организмов у животных с привитыми опухолями и у больных раком людей, которые принимали препараты чаги, не позволили определить механизм их действия на опухоль [104-116]. Было сделано предположение, что чага, не обладая специфическим действием на опухоль, оказывает тонизирующее влияние на центральную нервную систему, а в дальнейшем, при длительном лечении, нормализует нарушенные обменные процессы в организме и тем самым оказывает тормозящее действие на рост опухоли [117]. Противоопухолевое действие чаги показано также в более поздних исследованиях [16,17,28,29].

Сухой экстракт, полученный на основе водного извлечения с применением ультразвука [7], превосходит в 1,5 раза по адаптогенной активности и в 2 раза по противоязвенному действию препарат бефунгин. Эти свойства экстракта авторы объясняют полисахаридной и флавоноидной фракциями, выделенными из экстракта [8]. Противоязвенный эффект этих фракций реализуется в основном за счёт снижения числа деструкций на слизистой оболочке желудка, а также снижения количества животных с язвами в группе. Этот экстракт эффективно тормозил образование метастазов у мышей с привитой карциномой лёгких Льюиса. Процент торможения развития метастазов при назначении бефунгина составлял 64 %, а при назначении сухого экстракта чаги – 99 %.

Поскольку иммунная система обеспечивает безопасность жизнедеятельности организма и борется с образующимися в нём раковыми клетками, рост или регрессия раковых клеток в теле хозяина зависит от его статуса пролиферации клеток и апоптоза [118]. То есть развитие раковых клеток в теле хозяина определяется экспрессией bax и bcl -2 генов [119-120]. Bax принадлежит к семейству bcl -2, продукты которых регулируют смерть клетки, тогда как продукты bcl -2 распознаются как факторы выживания для многих типов клеток, в том числе раковых [118]. Cчитается, что жизнедеятельность раковых клеток влияет на функциональный потенциал клеток иммунной системы за счёт секреции иммуноподавляющих факторов. Это изменяет иммунные ответы организма хозяина [121-123]. Появился ряд сообщений о том, что раковые клетки посылают сигналы об апоптозе для лимфоцитов [124].

В настоящее время исследователи обращают внимание на ответ иммунной системы при введении медикаментозного средства, предназначенного для борьбы с раком. Показано, что препараты, приготовленные на основе чаги, обладают выраженным имунномодулирующим действием.

Препарат «БРМ-Ц», приготовленный на основе чаги, исследовался на мышах, подвергавшихся гамма-излучению. Через месяц после облучения у животных, получавших препарат в течение 7 дней, сразу после облучения обнаруживалось увеличение содержания имуннорегуляторных клеток. Процент Т-хелперных лимфоцитов возрастал с 7,8 до 16,0, нормализовалась цитотоксическая активность клеток киллеров [125].

В исследованиях [95], проведённых на мышах, экстракт чаги обладал широким спектром имуннотропной активности в концентрациях от 1 до 100 мг/кг, стимулировал в 1,5-2,0 раза пролиферативную активность силеноцитов, трансформированных in vitro поликлональным митогеном или аллоантигеном смешанной культуры лимфоцитов селезенки аллогенных мышей. Этот препарат индуцировал дополнительное образование цитолитических лимфоцитов. Кроме того, показана возможность коррекции экстрактом чаги вторичных иммуннодефицитных состояний у мышей, вызванных введением противоопухолевого цитостатика аранозы.

В работах [25,26] установлено противовоспалительное действие метанольного и этанольного экстрактов чаги. Водный экстракт чаги сдерживает повреждение ДНК в лимфоцитах под действием перекиси водорода [27].

Ключевой работой в объяснении механизма противоракового действия препаратов на основе чаги является исследование профессора Weifa Zheng с соавторами [126]. Для испытаний приготовлен водный экстракт восьмикратной экстракцией чаги кипящей водой. Удалив растворитель, получен сухой экстракт (СЭ), содержащий меланины (56,1 %), полифенолы (19,7 %) и полисахариды (22,9 %). Применение СЭ в дозе 100 мг/кг не показало иммунотоксичности на тестируемых здоровых мышах. Трансплантация Саркомы 180 привела к снижению индекса лимфоидных органов (селезёнки и тимуса) и в особенности снижению индекса Т лимфоцитов (с 2,37 мг/г до 1,26 мг/г). Применение СЭ в концентрации 20 мг/мл показало ингибирование пролиферации клеток Саркомы 180 на 30 % и подавляет рост раковых клеток в концентрации 60 и 100 мг/мл на 40 % и 57 % соответственно. В то время как СЭ во всех исследованных концентрациях (20, 60 и 100 мг/кг) не показал цитотоксического эффекта в отношении клеток почки К293.

У мышей с трансплантированной Саркомой 180 индекс Т лимфоцитов снизился вдвое, а лимфоцитов селезёнки на 2/3 от нормального уровня. Применение СЭ в дозе 60 мг/кг привел к незначительному увеличению индекса Т лимфоцитов от 1,26 до 1,81 мг/г и существенному повышению индекса лимфоцитов селезенки с 4,13 до 11,22 мг/г (в сравнении с мышами с трансплантированной Саркомой 180, которые не принимали СЭ). Оральное применение СЕ в дозе 60 мг/кг предохраняет лимфоидный орган у мышей с Саркомой 180 не только за счёт возрастания количества лимфоцитов селезёнки, но и за счёт стимуляции пролиферации лимфоцитов. Поскольку применение СЭ в дозе 100 мг/кг в сравнении с предыдущей дозой слегка снижает накопление лимфоцитов, их пролиферацию и антираковый эффект, авторами высказано предположение о том, что снижение иммуномодулирующего эффекта с повышением концентрации СЭ обусловлено присутствием в СЭ полисахаридов, которые обычно запускают инактивацию иммунной системы организма хозяина [127]. С другой стороны, Мизуно описал 21 разновидность полисахаридов, присутствующих в природной чаге, отличающихся по структуре [128]. Из них ксилогалактоглюкан обладает выраженной иммуномодулирующей и противораковой активностью[129].

Как упоминалось ранее, рост или регрессия рака в организме хозяина в большей степени зависит от экспрессии bax и bcl-2 генов. Многие противораковые средства уничтожают раковые клетки, запуская их апоптоз как in vitro, так и in vivo через митохондрии или через «рецептор смерти» [130,131]. Запуск апоптоза в ответ на химиотерапию заключается в индукции или активации различных медиаторов, включая экспрессию или функционирование генов семейства bcl-2 [132]. Массовое производство про-апоптозных протеинов за счёт сверх высокой экспрессии гена bax приводит к регрессии рака. В противоположность этому массовая экспрессия гена bcl-2 приводит к созданию условий для роста раковых клеток [133]. У мышей с привитой Саркомой 180 не наблюдалась экспрессия антиапоптозного гена bcl-2, в то время как отмечена экспрессия проапоптозного гена bax в нормально развивающейся Саркоме 180. Масса опухоли достигла 2,19 г через 14 дней после трансплантации. Лечение мышей, имеющих Саркому 180, с помощью СЭ в дозе 20 мг/кг существенно ингибировало экспрессию гена bcl-2 и стимулировало экспрессию гена bax. Это отразилось в уменьшении веса опухоли на 27,71 %. При применении СЭ в дозе 60 мг/кг экспрессия гена bax увеличилась максимально и вес опухоли снизился на 76,86 %. При увеличении дозы СЭ до 100 мг/кг стимуляция экспрессии гена bcl -2 и снижение роста опухоли стали менее эффективны.

Ранее было установлено, что в клетках с апоптозом синтез ДНК блокируется в фазе G0-G1 [133]. Соответственно, интервенция синтеза ДНК раковых клеток становится одной из терапевтических целей противораковых лекарств. Основная терапия рака обычно применяет ДНК – повреждающие агенты, такие, как ионизирующая радиация и химиотерапевтические средства в дополнение к хирургическому вмешательству. Однако применение этих агентов также приводит к сильнейшему подавлению лимфоцитов организма хозяина в то же время, когда запускается апоптоз в раковых клетках [134]. Побочные эффекты химиотерапии очень сильно лимитируют лечебные дозы и прогнозы на выздоровление. Бурсцук с соавторами [135] показали, что водный экстракт чаги блокировал митоз клеток HeLa с возрастанием числа клеток в фазе G0-G1 in vitro. При нормальном росте клеток Саркомы 180 более 60 % клеток были в фазах G2-M, 35 % в S и только 2,02 % в G0-G1 фазе. В соответствии с их статусом активного роста только 2,06 % клеток имели стадию апоптоза. Динамика количества клеток Саркомы 180, находящихся в G0-G1 фазе, в зависимости от применённой концентрации СЭ составило: 20 мг/мл – 32,54 %, 60 мг/мл – 86,79 %, 100 мг/мл – 34,11 %. Апоптоз клеток Саркомы 180 существенно возрастал при применении СЭ и составил 22,28 %, 34,67 % и 43,36 % соответственно указанным концентрациям СЭ по сравнению с апоптозом, наблюдаемым в нормально развивающихся клетках Саркомы 180, – 2,36 %. С другой стороны, СЭ также показал защитный эффект от окислительного повреждения ДНК в лимфоцитах человека [27]. Эти результаты отчётливо демонстрируют, что СЭ селективно запускает апоптоз раковых клеток.

TNF является одним из факторов, выделяемый активированными макрофагами [136]. Адекватная доза TNF может воздействовать на рецептор, запускающий апоптоз [137]. В норме TNF-α ответ макрофагов у здоровых мышей находится на уровне ca.10 pg/ml в фильтратах культуры и достигает до 22,35 pg/ml и 68,73 pg/ml при применении СЭ в дозе 20 и 60 мг/мл соответственно. Повышение концентрации СЭ до 100 мг/мл приводит к снижению TNF-α в фильтрате культуры до 55,69 pg/ml. В сравнении – этот показатель у мышей с Саркомой 180 в фильтрате культуры составлял 4,27 pg/ml. Таким образом, одним из механизмов для запуска апоптоза раковых клеток с помощью СЭ, вероятно, является активация макрофагов и, возможно, других лимфоцитов, что приводит к увеличению выделения TNF. Следовательно, препарат из чаги (СЭ) осуществляет эффективную защиту лимфоцитов от индуцированного раковой опухолью их апоптоза и имеет значительный потенциал для индуцирования апоптоза в раковых клетках. Его применение приводит к активации клеток иммунной системы и усилению ими защиты организма в отношении онкогенеза.